基因工程毕业论文开题报告
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论文(设计)题目：农杆菌介导的西瓜NPR1基因遗传转化
选题的意义：
西瓜为葫芦科植物，是夏季重要水果。近年来，西瓜生产中病毒感染严重，影响产量和品质。化学农药防治存在农药残留问题，所造成的环境问题日益严重突出。因此选用生物工程技术选育抗病毒的良种已经成为当务之急，植物基因工程为抗病育种提供了新途径。
研究的主要内容：
1、查阅收集文献资料，熟悉相关研究内容。
2、制订出研究方案、实验方法。
3、对西瓜种子进行浸染、共培养的时间的测定；
4、开展不定牙分化、不定根生根的'转化率的测量；
5、试验在分化过程中不同激素浓度对分化过程的影响，并确定最佳浓度；
6、试验在分化过程中不同Hy筛选浓度对分化过程的影响，并确定其最佳浓度；
7、对实验数据、结果做出分析、总结。
研究综述(前人的研究现状及进展情况)：
1992年Serrano等用农杆菌介导法将hlaI基因转入西瓜，转化的西瓜在离体状态下对Nacl产生较高抗性。
1991—1997年黄学森、彭学贤、万莉、王慧中等，将WMV的外壳蛋白基因导入西瓜植株，获得抗性材料，并获农业部批准进行安全释放试验。
1997年肖光辉等采用DNA浸胚法，将外源瓜DNA导入西瓜，变异株的生长势明显增强，而对照西瓜叶部病害较重。
1998年Chen-ShawChen等通过花粉管途径将抗镰刀枯萎并基因导入西瓜转化植株表现出枯萎的抗性。
1998年到2003年，中国农业大学生物技术国家实验室、新加坡国立大学、山西金鼎种业公司合作，将WMVCP基因、ZYMV复制酶基因、CMV复制酶基因通过农杆菌介导，成功导入西瓜植株，经温室及大田抗病毒鉴定表明：其抗性达到中抗以上水平。
但尚未见有关农杆菌介导法将NPR1基因转入西瓜的报道。
拟采用的研究方法、步骤：
一、方法：农杆菌介导法
二、步骤：
1、外植体(西瓜子叶)的获得；
2、农杆菌菌叶浸染子夜，置MS+6—BA1.0mg/L培养基、暗箱共培养2—3天；
3、无菌水清洗4次后，无菌纸吸干，置MS+6—BA1.0mg/L+Cef100mg/L+Hy培养基上诱导丛生牙的分化；
4、转化牙转入MS+6—BA+IBA+Cef+Hy培养基中成苗；
5、转2.0CM高的苗于MS+6—BA+IBA+NAA1.0mg/L+Cef+Hy培养基中生根；
6、将已生根的无菌苗移致花盆中，一个月后转入大田；
7、PCR检测。
研究工作进度安排：
20XX年12月份诱导子叶丛生牙的分化；
20XX年1月到2月成苗、生根；基本掌握PCR检测技术；
20XX年3月到4月移栽、DNA提取、PCR检测、统计和分析实验数据，完成毕业论文初稿；
20XX年5月份毕业论文定稿。
参考文献目录：
[1]农杆菌转化获得转基因西瓜植株，浙江大学学报，2000年；
[2]葫芦科作物转基因研究进展，细胞生物学杂志，2002年；
[3]西瓜转基因抗病毒病新材料BH—1，2004年。
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