鼻渊灵颗粒剂提取工艺探析
毕业论文
【摘要】 目的优选鼻渊灵颗粒剂的提取工艺。方法以黄芩苷为指标，采用高效液相色谱法测定黄芩苷含量；用正交实验L9(34)优选鼻渊灵颗粒剂的最佳提取工艺。结果黄芩苷在0.177 2 ～1.772 0 μg范围内线性关系良好（r＝0.999 4，n＝7）,平均回收率为99.3 % , RSD =2.26 % (n = 6)；优选的提取工艺为：以10倍药材量的水提取3次，1 h/次，醇沉浓度为50%。结论建立的含量测定方法准确、重复性好，优选出的提取工艺稳定、合理、可行。
【关键词】 鼻渊灵颗粒剂 黄芩苷 正交实验 提取工艺 反相高效液相色谱法
鼻渊灵颗粒剂是治疗鼻渊的'有效方药，由黄芩、白芷、苍耳子等组成。黄芩苷是黄芩中具有抗菌作用的活性成分, 亦是鼻渊灵颗粒剂中的主要有效成分。为了提高黄芩苷得率，我们用正交实验法对影响黄芩苷提取条件如提取次数、煎煮时间、加水量、醇沉浓度等进行了研究, 探索适合工业化生产、工艺操作简单、得率高的提取工艺。现报道如下。
1 仪器与材料
1.1 仪器日本岛津高效液相色谱系统SPD-10AVD，SPD-10A VP紫外检测器，手动进样器，N2010 色谱工作站；1810－BC石英自动双重纯水蒸馏器（江苏省金坛市白塔石英玻仪厂）；TD200/型电子天平（天津天平仪器有限公司）；TG328B型分析天平（上海精科仪器厂）；KQ-250B型超声波清洗机（上海必能信超声有限公司）。
1.2 材料黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号110715-200514）；甲醇（色谱纯，天津市康科德科技有限公司）；磷酸（分析纯，开封化学试剂总厂）；水为自制新鲜双蒸水。
黄芩、白芷、鹅不食草、苍耳子、藿香、薄荷等药材均购于石家庄乐仁堂药房，经鉴定符合2005版《中国药典》规定。
2 方法与结果
2.1 正交实验设计［1］根据预实验结果，影响提取工艺的主要因素有：加水量，提取次数，提取时间，醇沉浓度。本实验采用L9(34)正交表安排实验。以黄芩苷含量为指标，对鼻渊灵的提取工艺进行优选。因素水平表见表1。
2.2 样品提取液的制备按正交表的实验安排，依处方比例称取各味药材，加水浸泡30 min，煎煮、合并提取液，静置过夜，滤过，上清液浓缩成流浸膏，放至室温，醇沉，减压抽滤，滤液回收乙醇至无醇味，调整至每毫升药液含原药材1 g，得样品提取液。
表1 因素水平（略）
2.3 含量测定
2.3.1 色谱条件固定相为迪马公司Diamonsil ODSC18反相柱（200 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为甲醇∶水∶磷酸（53∶47∶0.2,V/V/V）；流速1.0 ml/min ；检测波长274 nm；柱温为室温；进样量20 μl，理论塔板数按黄芩苷计不低于2 500。
2.3.2 对照品溶液的制备［2］精密称取60℃真空干燥4 h的黄芩苷对照品4.43 mg，置 50 ml 棕色容量瓶中，加入甲醇，超声处理20 min，放至室温，用甲醇定容，混匀，得0.088 6 mg/ml 对照品溶液。
2.3.3 线性关系考察 精密量取对照品溶液1.0，2.0，2.5，5.0，7.5 ，8.0 ，10.0 ml置10 ml棕色容量瓶中，加入甲醇，超声处理20 min，放至室温，再用甲醇定容，进样前用0.45 μm微孔滤膜过滤，测定峰面积。以峰面积（Y）对进样量（X）作图，得回归方程为：Y＝32 689 834X－43 715（r＝0.999 4，n＝7）。结果表明，黄芩苷进样量在 0.177 2 ～1.772 0 μg范围内呈良好线性关系，最低检测限为0.177 2 μg。
2.3.4 精密度实验精密量取对照品溶液7.5 ml，置10 ml棕色容量瓶中，加入甲醇，依法处理。连续进样5次，测定峰面积。以峰面积大小计算RSD=0.166% (n=5)，结果表明本测定系统精密度良好。
2.3.5 重复性实验取对照品溶液5份，每份1.0 ml，置10 ml棕色容量瓶中，加入甲醇，依法处理，进样，测定峰面积。以黄芩苷含量计算RSD=0.08%(n=5)，重复性良好。
2.3.6 稳定性实验精密吸取同一份供试液，依法于室温下0，1.0，4.0，8.0，12.0，24.0 h进样，测定峰面积，计算RSD＝0.63％（n=6）。表明本检测系统条件下，供试品溶液24 h内稳定性良好。
2.3.7 加样回收率实验平行精密吸取6份已知含量的供试品原液1 ml，置10ml棕色容量瓶中，分别加入黄芩苷标准品溶液（0.088 6 mg/ml ）3.0，3.0，3.8，3.8，4.6，4.6 ml，加入甲醇，依法处理，在上述色谱条件下进行检测。测得6个样品的加样回收率分别为96.2%，101.9%，101.5%，98.5%，97.6%，100%，平均加样回收率为99.3%，RSD=2.26%。
2.3.8 样品测定精密吸取1～9号供试液各1.0 ml，依法处理，按“2.3.1”项下色谱条件检测。正交实验结果见表2，方差分析结果见表3。
表2 L9(34)正交实验结果（略）
表3 方差分析（略）
由表2可见，以黄芩苷的提取总量为指标，各因素中影响大小为A>C>B>D,即提取次数>加水量>提取时间>醇沉浓度，最佳提取条件为A1B2C3D2，即提取3次，每次提取60 min，加水量为10倍，醇沉浓度为50%。方差分析表明，提取次数和加水量为显著因素（P<0.05）。
2.4 验证实验依处方比例称取药材3份，按优选出的提取工艺，照“2.2”项下平行制备样品提取液，在上述色谱条件下测定黄芩苷的含量，每个样品进样两次，求平均值。测得3批样品的浓度分别为0.053 215，0.056 524，0.052 684 mg/ml，平均浓度为0.054 141 mg/ml，均高于正交实验各样品浓度，说明本最佳提取工艺合理。
3 讨论
在含量测定中，为了提高黄芩苷的溶解性，需要超声处理。由于超声波本身会使溶液温度升高，而甲醇的膨胀系数较大，且易挥发，所以要注意保持恒温，被超声物要在密封情况下进行处理，最后再用甲醇定容。
【参考文献】
［1］ 黄祖良,刘胜娟.用正交试验法优选黄芩苷浸提工艺［J］. 广西中医学院学报,2001,4(2):74.
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