不同条件下人免疫球蛋白类制品HCV抗体检测结果的比较
毕业论文作者单位：730046 甘肃兰州，兰州生物制品研究所血液制剂室
【摘要】 目的 主要探讨人免疫球蛋白类制品在不同条件下对HCV抗体检测结果的影响。方法 使用不同的4个生产厂家的丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒（ELISA），用两种不同的稀释液将免疫球蛋白的蛋白浓度稀释至1%。比较免疫球蛋白原液在酸性（pH4）条件下和中性条件下对检测结果的影响；人免疫球蛋白和静注人免疫球蛋白(pH4)加入稳定剂后对检测结果的影响；静注人免疫球蛋白在酸性条件（pH4）下和中性条件下对检测结果影响。结果 两种不同的稀释液对检测结果进行比较，结果完全1致；在酸性条件下，两种不同的稀释液，有1厂家检测结果OD值在灰区内。结论 酸性（pH4）条件下的制品不同厂家的丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒检测结果有明显差异，使用不同的稀释液和制品中有无稳定剂对检测结果没有影响。
【关键词】 人免疫球蛋白 HCV抗体 ELISA
用酶联免疫吸附（ELISA）方法对原料血浆实施HBsAg、HCV抗体和HIV抗体的筛查有利于保障原料血浆的安全［1］。目前对原料血浆的筛查采用单采血浆站使用1种诊断试剂进行初筛，血液制品生产企业使用不同厂家的另1种诊断试剂进行复查，即便经过了两次严格的逐袋筛查，仍有因隐匿性丙肝感染而导致漏检的。目前公认，采用WHO推荐的低温乙醇法并经病毒灭活处理的人血白蛋白和免疫球蛋白是安全的血液制品［2］。即便如此，为进1步提高血液制品的安全性，今年国家食品药品监督管理局已要求血液制品生产企业积极摸索和建立人免疫球蛋白类制品进行HCV抗体和HIV抗体的检测方法及标准，鉴于此因，笔者选择10个批次的经低pH放孵病毒灭活的人免疫球蛋白，在同1蛋白浓度条件下（蛋白浓度为1%），对不同pH值条件和按制品工艺要求加入不同稳定剂，以及两种不同蛋白稀释液对HCV抗体检测结果的影响进行了比较，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 样品来源 样品取自本所血液制剂室低pH放孵病毒灭活后的10批人免疫球蛋白原液（编号1～10）。
1.2 试剂与仪器
1.2.1 试剂 丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒（ELISA）分别由厂家A，批号：C20061103、C20070101、C20070203；厂家B，批号：20061113、20070107、20070203。厂家C，批号：20060801、20060802；厂家D，批号：2006085806、2006095807、2006115808。
1.2.2 仪器 酶标仪，型号：Multiskan Mk3（芬兰雷勃公司生产），洗板机，型号：Wellwash 4 Mk2（芬兰雷勃公司生产），检测按仪器和试剂盒要求操作。
1.3 稀释方法 （1）样品A 低pH放孵病毒灭活后的免疫球蛋白原液，不含任何稳定剂，pH3.8～4.1；样品B：低pH放孵病毒灭活后的免疫球蛋白原液，按生产工艺要求配制为肌肉注射人免疫球蛋白，含氯化钠、甘氨酸、麦芽糖、硫柳汞，作为稳定剂，pH6.7～7.0；样品C：低pH放孵病毒灭活后的.免疫球蛋白原液，按生产工艺要求配制为静注人免疫球蛋白，含麦芽糖作为稳定剂，pH3.8～4.1。分别使用生理盐水和相应的诊断试剂盒的稀释液将以上3类样品的蛋白浓度稀释为1%，pH值不做调整，为原制品pH值，所得样品编号为ⅠA1、ⅠA2； ⅡB1、ⅡB2； ⅠC1、ⅠC2，1为生理盐水稀释，2为诊断试剂盒稀释液稀释，Ⅰ为酸性条件下样品；Ⅱ为中性条件下样品。（2）将样品A的pH值调整为6.7～7.0；将样品B的pH值调整为3.8～4.1；将样品C的pH值调整为6.7～7.0，按方法（1）稀释以上样品，所得样品编号为ⅡA1、ⅡA2；ⅠB1、ⅠB2；ⅡC1、ⅡC2。
所得样品按各诊断试剂厂家说明书进行检测，灰区为CO值±15%的范围。
2 结果
应用不同稀释方法所获得的样品，用不同厂家的试剂盒进行检测，每个样品检测两孔，检测结果见表1。表1 10批不同条件的样品4个不同厂家试剂HCV抗体检测结果
3 讨论
以上结果表明，10批人免疫球蛋白类制品，对免疫球蛋白原液、人免疫球蛋白和静注人免疫球蛋白制品进行检测使用生理盐水稀释［3］和使用试剂盒稀释液稀释，然后按检测试剂说明书进行检测，其结果是完全1致的。经对免疫球蛋白原液（不含任何稳定剂），人免疫球蛋白（含稳定剂），静注人免疫球蛋白（含稳定剂），检测结果表明，不同的制品所含稳定剂与否对检测结果也没有影响；在低pH条件下，免疫球蛋白原液（低pH放孵后），静注人免疫球蛋白(pH4) 经两种不同稀释液稀释，发现厂家B的检测试剂盒10个批次的检品OD值均在灰区内，另外3个试剂厂家的检测结果均为阴性。文献报道用ELISA法检测HCV抗体灰区血样经重复检测有12.6%（11/87）的假阴性率［4］，并且对落在灰区范围内的随机抽样样本进行的PCR检测，HCVRNA的阳性率为18%（3/11）。表明灰区内样本确实存在着病毒复制［5］，如果不设置灰区，就有可能造成漏检，因此，为了提高制品安全性，灰区的设置有着重要的意义［6］。但是，不同HIV抗体检测对丙型肝炎的检测结果有明显差异［7，8］。ELISA试剂生产厂家包被的抗原片段和生产工艺存在差异是影响试剂盒质量的主要因素［9，10］，但是从另外3家诊断试剂盒的检测结果和B厂家对同1批号制品在低pH条件下的结果来看，样品的低pH值是影响厂家试剂检测结果并导致样本落在灰区的原因。由低温乙醇法分离工艺并经低pH放孵病毒灭活后制备的人免疫球蛋白类制品是安全的，但是在成品检测过程中，由于静注人免疫球蛋白（pH4）制品的酸性特点，有可能使个别厂家生产的诊断试剂盒检测的样品的OD值落在灰区内，甚至造成误判的情况。为提高血液制品的安全性，国家食品药品管理局要求对血液制品生产用原料血浆实施“检疫期”，经对供浆者血浆样本再次进行病毒筛查并检验合格，方可投入生产。除此之外，还应积极摸索和建立免疫球蛋白类制品检测HIV抗体、HCV抗体的方法及标准，随着此项工作的不断深入，笔者认为，对影响HCV抗体、HIV抗体检测结果各种因素，会逐步找到解决的方法。
【参考文献】
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