高效液相色谱法测定复方养血生发片中二苯乙烯苷的含量

时间:2020-11-14 15:23:09 药学毕业论文 我要投稿

高效液相色谱法测定复方养血生发片中二苯乙烯苷的含量

  【摘要】 高效液相色谱法测定复方养血生发片中何首乌有效成分二苯乙苷(2,3,5,4′?四羟基二苯乙?2?O?β?D?葡萄糖苷)的含量。方法 流动相为乙腈?1%磷酸 (体积比15∶85);色谱柱为C18 柱;紫外检测波长为320 nm。结果 二苯乙苷在1.04~3.64 μg范围内具有良好的线性关系;平均回收率为99.36%,RSD为0.41%(n=9)。结论 该方法灵敏度、专属性高、重现性好,快速简便。

  【关键词】 高效液相色谱法 二苯乙苷 复方养血生发片

  Abstract:Objective To determinate the content of stilbene glycoside, an active ingredient of Polygonum multiflorum, in the compound Yangxueshengfa tablets by HPLC. Methods The mobile phase consisted of acetonitrile?1% phosphoric acid (15∶85). The column was C18 column. A UV?detector was employed and the detection wavelength was 320 nm. Results 2,3,5,4’?tetrahydroxystilbene?2?O?β?D?glucoside has a good linearity within the concentration range of 1.04-3.64 μg/mL. The average recovery was 99.36% (n=9, RSD=0.41%). Conclusion The method is rapid, selective and reproducible.

  Key words:HPLC;stilbene glycoside; compound Yangxueshengfa tablets

  复方养血生发片是由当归、地黄、五味子、制何首乌、熟地、木瓜等中药材制成的复方制剂。制何首乌具有补肝肾、益精血、乌须发的功效,主要含二苯乙苷(2,3,5,4′?四羟基二苯乙?2?O?β?D?葡萄糖苷)、大黄素、大黄酸等成分[1]。二苯乙苷为何首乌的特征成分,其含量测定方法有紫外分光光度法[2-3]、高效液相色谱法[4],但在药品标准中均没有收载。本文采用高效液相色谱法对其制剂中二苯乙苷含量进行测定,结果发现此法操作简便、快速、准确可靠,可以作为有效的质量控制方法。

  1、仪器与试药

  Waters高效液相色谱仪,1525Binary Pump高压梯度泵,Rheodyne7725iw/1500Mount进样阀, 2487Dual Wavelength UV Detector检测器,Breeze data management software Add?on kit液相色谱工作站。

  复方养血生发片(广东怡康制药有限公司生产),二苯乙苷对照品(中国药品生物制品检定所,供含量测定用,批号:0844?9802),乙腈(色谱纯,Huneywell International Inc.),其他试剂均为分析纯。

  2、方法验证与结果

  2.1 色谱条件与系统适用性实验

  色谱柱:Xterra column C18分析柱(5 μm,3.9 mm×150 mm);流动相:乙腈?0.1%磷酸水溶液(体积比20∶80) ;流速:1.0 mL/min;检测波长:320 nm;理论板数不低于3 000。

  2.2 供试品溶液的制备

  取本品20片,精密称定,研细,精密称取细粉约0.5 g,置三角瓶中,加甲醇50 mL,加热回流60 min,滤过,用少量甲醇洗涤,合并滤液和洗液,挥干,残渣加水10 mL使溶解,乙醚萃取两次,每次20 mL,水层加饱和正丁醇萃取4次,每次15 mL,合并正丁醇液,挥干,用流动相溶解,并转移至10 mL容量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,即得。

  2.3 对照品溶液的制备

  精密称取二苯乙苷对照品适量,用流动相稀释制成每1 mL含0.26 mg的溶液,即得。

  2.4 线性试验

  精密吸取二苯乙苷对照品溶液(0.26 mg/ mL),用流动相稀释成每1 mL含二苯乙苷0.052、0.078、0.104、0.156、0.182 mg的溶液,按“2.1”项下色谱条件分别进样20 μL进行测定。以峰面积积分值(A)为纵坐标,二苯乙苷的量(m)为横坐标绘制标准曲线,得回归方程:A= 1.778×106m+6.958×104 ,r=0.999 5。表明二苯乙苷在1.04~3.64 μg范围内具有良好的线性关系。

  2.5 稳定性试验

  取供试品溶液分别于0、2、4、8、24 h进样测定,结果平均质量分数为 0.210 mg/g,RSD=1.85%,表明样品在24 h内稳定。

  2.6 精密度试验

  精密吸取对照品溶液20 μL,重复进样5次,测定其峰面积,结果平均峰面积为456 799.6,RSD=0.72%。

  2. 7 重复性试验

  配制同一批号样品5份,分别进样测定,结果平均质量分数为1.405 5 mg/g,RSD=1.85%。

  2. 8 回收率试验

  采用加样回收法,精密称取已知含量样品(1.405 5 mg/g)0.40 g,定量分别加入浓度为0.40、0.50、0.60 mg/mL的`二苯乙苷对照品溶液各1 mL,按“2.1”项下方法进样20 μL进行测定,计算回收率,结果平均回收率为99.36%,RSD=0.41%,见表1。

  2. 9 样品测定

  分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液20 μL,按“2.1”项下色谱条件测定,计算二苯乙苷含量。结果见表2。

  3、讨 论

  3.1 检测波长的选择

  参照《中国药典2000版》中何首乌药材的含量测定方法选用320 nm为检测波长表1 二苯乙苷回收率试验测定结果表2 6批样品含量测定结果

  3.2 提取方法的选择

  比较了用甲醇为溶剂超声波处理30 min、加热回流30 min、索氏回流4 h 3种方法,甲醇加热回流所制备的供试品溶液二苯乙苷含量较高,故选择加热回流作为提取方法。

  3.3 提取时间的选择

  通过对加热回流提取30 min,60 min,90 min的比较,提取60 min,含量测定值较高,故提取时间选择为60 min。

  3.4 纯化方法的选择

  比较了用甲醇提取后直接进样测定,乙醚萃取后再用饱和正丁醇萃取,上氧化铝柱(200 目,10 g,d=1.5 cm),上C18小柱(3 g)等多种方法,最后采用乙醚萃取后再用饱和正丁醇萃取的方法。

  【参考文献】

  [1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部[S].北京:化学工业出版社,2000:139.

  [2] 陆瑞兰.一阶导数光谱法测定何首乌中总二苯乙苷的含量[J].中成药,1990(3):16-18.

  [3]白研,陈志澄,毋福海,等.广东德庆与广西宜州首乌中二苯乙苷含量测定[J].广东药学院学报,2002,18(2):101-102.

  [4] 张纯.高效液相色谱法测定何首乌中二苯乙苷的含量及其稳定性考察[J].中国中药杂志,1999(6):37-39.

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