浅谈高效液相色谱法测定白花蛇舌草中槲皮素的含量

时间:2020-09-30 19:00:05 药学毕业论文 我要投稿

浅谈高效液相色谱法测定白花蛇舌草中槲皮素的含量

  【摘要】 目的 建立高效液相色谱法测定白花蛇舌草中槲皮素含量的方法。方法 采用Hypersil BDS C18色谱柱(4.6 mm×200 mm,5 μm),流动相为甲醇?水?磷酸(体积比50∶50∶0.2) ,检测波长为370 nm。结果 槲皮素在0.08~ 0.32 μg 的范围内与峰面积呈良好线性关系(r=0.999 6),平均加样回收率为101.5%,RSD为0.8%(n=6)。结论 本法快速、简便、准确,可用于测定白花蛇舌草中槲皮素的含量,为评价白花蛇舌草的内在质量提供科学依据。

  【关键词】 白花蛇舌草 槲皮素 含量测定 高效液相色谱法

  Abstract:Objective To determine the content of quercetin in Hedyotis diffusa Willd. Methods The analysis was performed on an HPLC C18 column (4.6 mm×200 mm,5 μm) at the detection wavelength of 370 nm. The mobile phase consisted of 0.2% phosphoric acid?methanol (50∶50) with a flow rate of 1 mL/min. Results The calibration curve was linear in the range of 0.08-0.32 μg of quercetin (r=0.999 6).The average recovery was 101.5% with RSD 0.8% (n=6).Conclusion The method is simple,rapid and accurate for the determination of quercetin in Hedyotis diffusa Willd, which could be used for the quality control of Hedyotis diffusa Willd.

  Key words:Hedyotis diffusa Willd.; quercetin; HPLC

  白花蛇舌草为茜草科植物白花蛇舌草(Hedyotis diffusa Willd.)的干燥全草,研究表明该植物主要含有黄酮类、三类、蒽醌类、环醚苷类、甾醇类、烷烃类等化学成分,具有抗肝炎、抗肿瘤、抗病毒、抗炎抑菌、降血脂及降血糖等多种药理活性[1]。白花蛇舌草中黄酮类化合物的含量测定未见文献报导,本文采用HPLC法测定了白花蛇舌草中槲皮素的含量,为评价白花蛇舌草的内在质量提供科学依据。

  1 仪器与药品

  高效液相色谱仪:P230高压恒流泵/DAD230二极管阵列检测器(大连依利特分析仪器有限公司),Hypersil BDS C18色谱柱(4.6 mm×200 mm,5μm,大连依利特分析仪器有限公司);电子精密天平(Ohaus);KS?1500超声清洗器(宁波科胜仪器厂);高速万能粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司)。

  白花蛇舌草(市售,批号2006001,2006002,2006003),经本校药植教研室陈再兴老师鉴定均为白花蛇舌草(Hedyotis diffusa Willd.);槲皮素对照品(中国药品生物制品检定所,批号100081-200406,供含量测定用);甲醇为色谱纯;水为重蒸水。

  2 结果与分析

  2.1 色谱条件

  色谱柱:Hypersil BDS C18色谱柱(4.6 mm×200 mm,5 μm),流动相:甲醇?水?磷酸(体积比50∶50∶0.2);检测波长:370 nm,流速:1 mL/min,柱温:25 ℃ ,进样量:20 μL。色谱图见图1、2。

  2.2 对照品溶液的制备

  精密称取经五氧化二磷干燥过夜的槲皮素对照品适量,加甲醇制成每1 mL含槲皮素10 μg的`溶液,即得。

  3 样品溶液的制备

  取白花蛇舌草药材粗粉1.0 g,精密称定,置烧瓶中,精密加入50%(体积分数)甲醇20 mL和盐酸1 mL,密塞,称定重量,加热回流2 h,放冷,用50%(体积分数)甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液5 mL,置10 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜 (0.45 μm) 滤过,取续滤液,即得。

  2.4 系统适用性试验

  分别取对照品溶液、供试品溶液各20 μL进样测定,理论塔板数为15 000,供试品溶液色谱图中槲皮素峰与相邻杂质峰的分离度大于1.5。

  2.5 线性关系的考察

  精密称取经五氧化二磷干燥过夜的槲皮素对照品10.0 mg,加甲醇定容至100 mL,分别精密量取上述对照品溶液0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6 mL 置10 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,制成系列浓度的溶液。分别精密吸取各溶液20 μL,注入液相色谱仪,记录色谱图。以槲皮素峰面积(A)为纵坐标,槲皮素进样量(m)为横坐标,绘制准曲线,得回归方程为 A=274.79m+54.43,r=0.999 6,结果表明槲皮素在0.08~0.32 μg范围内与峰面积成良好线性关系。

  2.6 精密度试验

  取槲皮素对照品溶液20 μL ,重复进样6次分别测定峰面积为2 949,2 911,2 891,2 946,2 950,2 957, RSD为0.9%(n=6),结果表明精密度良好。

  2.7 稳定性试验

  取供试品溶液(批号2006001),分别在2、4、6、8、10、12 h进样,测得槲皮素峰面积为1 437,1 422,1 451,1 430,1 421,1 425,RSD为0.8%,结果表明供试样品溶液在12 h内稳定。

  2.8 重现性试验

  取同一批号的白花蛇舌草5份,按“2.3”制备样品溶液,进行测定,测得槲皮素的峰面积为1 447,1 452,1 425,1 419,1 423,RSD为1.1%(n=5),结果表明该方法重现性良好。

  2.9 回收率试验

  精密称取已知含量的白花蛇舌草(批号2006001)5份,分别加入槲皮素对照品适量,按“2.3”制备供试品溶液,测定含量,结果测得回收率101.8%,102.4%,101.9%,101.1%,100.4%,平均值为101.5%;RSD为0.8%。

  2.10 样品测定

  分别取白花蛇舌草药材3批(批号2006001,2006002,2006003),按“2.3”制备供试品溶液,进样测定,结果测得槲皮素质量分数分别为:0.091 3,0.085 7和0.088 0 mg/g。

  3 讨 论

  3.1 文献报道槲皮素的检测波长为360nm[2,3]、254 nm[4] 、368 nm[5],本文利用DAD二极管阵列检测器对槲皮素对照品进行全波长扫描,结果最大吸收峰为370.2 nm,故选择370 nm为检测波长,见图3。

  3.2 实验考察了不同比例的甲醇?水为流动相,最后确定流动相为甲醇?水?磷酸(体积比50∶50∶0.2),柱温25 ℃,流速1 mL/min,样品中槲皮素达到良好的分离。

  3.3 白花蛇舌草中黄酮类化合物的含量测定未见文献报导,本文采用高效液相色谱法测定了白花蛇舌草药材中槲皮素的含量,操作简便、快速,可作为白花蛇舌草质量控制的有效手段。

  【参考文献】