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论乌龙丹对大鼠局灶性脑缺血脑组织氧自由基的影响
论文关键词：乌龙丹；氧自由基；大鼠局灶性脑缺血模型论文摘要：目的：观察乌龙丹对大鼠局灶性脑缺血脑组织中氧自由基的影响。方法：复制大鼠局灶性脑缺血病理模型，于缺血后24h，取脑组织测定SOD活性及MDA含量。结果：缺血24h后，脑组织SOD活性明显降低而MDA含量明显升高(P＜0.05)；乌龙丹可使脑组织中SOD活性提高，同时使MDA含量降低(P＜0.05)。结论：乌龙丹抗缺血性脑损伤的作用机理可能与其减轻氧自由基毒性反应有关。
缺血性脑病是常见病、多发病，现代表明，氧自由基的毒性作用是引发脑缺血后神经细胞损害病理级联反应的重要环节，本实验通过检测乌龙丹对大鼠局灶性脑缺血模型中脑组织氧自由基的变化情况，以探讨治疗缺血性脑病临床经验方乌龙丹是否可通过影响缺血脑组织中氧自由基的含量，从而起到神经元保护作用。
1 实验
乌龙丹物，由南方医科大学南方医院房提供，加工为流浸膏(2.5g/mL)；MDA、SOD试剂盒(南京建成生物制品研究所)，蛋白定量试剂盒(伊利康生物工程研究所)，分析纯冰乙酸，20％磷钨酸溶液，0.8％硫代巴比妥酸(TBA)溶液(南方医科大学试剂中心)；754型紫外分光光度计(上海第三分析仪器厂)，高速低温离心机(美国贝克曼公司)。
2 实验分组
Wistar大鼠36只，清洁级，雌雄各半，体重(250±20)g，批号2004A068，由南方医科大学动物中心提供。随机分成正常组、假手术组、模型组，乌龙丹低剂量组、中剂量组、高剂量组。给药组术前灌服乌龙丹流浸膏，给药7天，低、中、高给量分别为1、2、4mL，正常组、假手术组和模型组灌服2mL生理盐水。于末次给药后2h造模，术后连续给药，24h后处死。
3 实验方法
3．1 模型制备 假手术组只做开颅术，不结扎血管；模型组与实验组开颅制作大鼠局灶性脑缺血模型，操作过程如下：结扎右侧颈总动脉，夹闭左侧颈总动脉，阻断右侧大脑中动脉。
3．2 样品制备 造模后24h立即处死动物，准确称取右侧大脑，在冰浴上分离出缺血区脑组织，以冰盐水冲洗后除去残血，吸干后称重，按1:9(W:V)比例加入冰生理盐水，制成10％脑匀浆液，离心1000×g，10min(4℃)，取上清液检测。
3．3 指标检测 蛋白含量测定用Lowery法，SOD检测用黄嘌呤氧化酶法，MDA检测用TBA显色法，均按试剂盒说明完成。
3．4 学处理 采用SPSS10.0统计分析软件处理。各项指标的实验数据以均数±标准差(x±s)表示，多组间计量资料采用单因素方差分析，P＜0.05定义为有统计学意义。
4 结 果
缺血24h后，与正常组对比，模型组脑组织中SOD活性减低、MDA含量升高(P＜0.05)；与模型组对比，乌龙丹3个剂量组均可提高SOD活性并降低脑组织MDA含量(P＜0.05)。
5 讨 论
脑缺血后，由于能量缺乏：钙泵功能失调，细胞膜去极化，大量的兴奋性氨基酸释放，激活钙通道，导致细胞外Ca2+内流，过量的Ca2+激活胞内依赖于Ca2+蛋白水解酶．黄嘌呤还原酶迅速转变为黄嘌呤氧化酶，同时缺血条件下ATP产生大量游离腺苷，降解为次黄嘌呤，次黄嘌呤在黄嘌呤氧化酶催化下转化为黄嘌呤，在转化过程中生成超氧阴离子等多种自由基，大量形成的氧自由基攻击蛋白、脱氧核酸和脂质膜，破坏细胞的功能和结构完整性，因而导致细胞的损害，实验表明应用自由基清除剂可有效减轻缺血性脑细胞损伤。
乌龙丹是名老臧堃堂教授经验方，全方由生黄芪、葛根、制首乌、川芎、丹参、地龙、全蝎、制僵蚕、水蛭、生晒参、石菖蒲、女贞子、白术、当归等14味组成，诸药合用具有益气话血、补肾填髓、化瘀通络的功效。本方治则以益气活血为主，是以补阳还五汤为基础化裁拟制，已有实验证明补阳还五汤具有抗自由基毒性作用。本研究结果显示：(1)缺血24h脑组织SOD活性降低、MDA含量升高；证实在大鼠局灶性脑缺血模型神经元损伤病理过程中存在自由基毒性病理反应。(2)乌龙丹可提高缺血后脑组织中SOD活性并降低MDA含量，而SOD及MDA是反映自由基损伤的指标，SOD能清除自由基而具有抗自由基损伤作用，NDA为脂质过氧化物的代谢产物，其含量的多少在一定程度上反映组织细胞损伤的程度，因而这一实验结果表明乌龙丹减弱了自由基的毒性反应，起到了抗氧化作用，从而产生了对缺血后神经细胞的保护作用。其作用机制可能是乌龙丹在自由基的生成过程某些环节中起到良性的调节作用，或增强了机体清除自由基能力，减轻自由基毒性反应所引起神经细胞损害，具体机制有待进一步研究探讨。
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