苦瓜水提取物对雄性小鼠精子影响?

时间:2017-06-10 药学毕业论文 我要投稿

                  作者:胡怡秀,刘秀英,马征,胡春生,张莹莹,尹进

【关键词】  苦瓜水 雄性小鼠精子

  苦瓜作为一种食兼用的草质藤木植物的果实,民间食用已有数百年,其药用价值越来越被人们所关注。随着研究的深入,人们发现苦瓜有较多的作用〔1-3〕和广阔的应用前景。对苦瓜的毒性研究发现,苦瓜对雄性动物具有较强的抗生育活性〔3〕。国内外学者采用不同方法对苦瓜食用部分进行了分离提取及鉴定,从苦瓜中曾分离出苷类、蛋白质、多肽、氨基酸、糖类、生物碱类、有机酸、脂类、甾类、类、微量元素等多种化学成份〔4〕。由于提取方法不同,导致苦瓜提取物成分各异,不同提取物的生物学作用亦不同。因此,本实验观察了苦瓜提取物对雄性小鼠精子的影响,旨在为更好地开发利用苦瓜系列产品提供科学依据。现报告如下。

  1 与方法

  1?1  材料

  1?1?1 苦瓜水提取物                   

  由湖南师范大学化学测试分析中心提供。

  1?1?2 实验动物及饲养                   

  清洁级昆明种小鼠,体重25~35?g(南华大学实验动物学部);实验动物生产许可证号为SCXX(湘)2004-0009,实验动物使用许可证号为SYXK(湘)2003-0002。实验期间动物房温度为21~24℃,湿度为56%~58%。

  1?2 方法〔5〕                   

  将25只小鼠随机分为5组,每组5只。试验组设10?000,5?000,2?500?mg/(kg·bw)3个剂量,采用40?mg(kg·bw)剂量的环磷酰胺为阳性对照,蒸馏水为阴性对照,小鼠按20?ml/(kg·bw)体积灌胃,每日1次,连续5?d,于末次灌胃后的第30?d处死动物,取两侧副睾,按文献〔5〕制备精子悬液。

  1?2?1  精子计数〔6〕                   

  将精子悬液滴入细胞计数池内,用高倍镜计数中央大格内5个中方格的精子数,结果乘以109即为每升悬液中的精子数。

  1?2?2 精子活动率〔6〕                  

  于(20±2)℃的室温下,在10?min内完成每只鼠1?000个左右精子活动力的观察,取悬液滴片,显微镜下将精子活动状态分为4级:Ⅰ:运动活泼,直线运动;Ⅱ:运动欠活泼,直线游动;Ⅲ:原地旋转,动作迟缓;Ⅳ:毫无活力,并按下式计算精子活动率:
精子活动率(%)=Ⅰ+Ⅱ+ⅢⅠ+Ⅱ+Ⅲ+Ⅳ×100

  1?2?3 精子存活率采用伊红试验〔7〕。                   

  取精子悬液和0?5%伊红水溶液各1滴混合,在1?min内高倍镜检查。活的精子不着色,死的精子染成淡红色或淡黄色,计算存活率。

  1?2?4 精子形态学观察〔5〕                  
 
  将精子悬液用4层擦镜纸过滤,吸滤液涂片,干燥后甲醇固定5?min,2%伊红染色1?h,用水轻冲、干燥。每只动物计数1?000个结构完整的精子,计算畸变精子发生率。



  1?3 分析                   

  数据进行χ2。

  2 结果

  2?1 苦瓜水提物对小鼠精子计数的影响                   

  2?500,5?000,10?000?mg/(kg·bw)剂量组小鼠精子数分别为(76?20±26?37),(56?40±15?11),(61?40±11?10)×109/ml,对照组为(78?40±45?86)×109/ml。单因素方差分析显示,4组精子计数总体比较差异无统计学意义(P>0?05)。

  2?2  苦瓜水提物对小鼠精子存活率的影响                   
  2?500,5?000,10?000?mg/(kg·bw)剂量组小鼠精子生/死比例分别为0?934,0?794,0?863,对照组为1?383,χ2检验显示,3个剂量组小鼠精子生/死比例较对照组显著减低(P<0?001)。

  2?3 苦瓜水提物对小鼠精子活动度的影响(表1) 表1 苦瓜水提物对小鼠精子活动度的影响(略)
                 
  χ2检验显示,5?000,10?000?mg/(kg·bw)剂量组较对照组小鼠精子活动率显著升高(P<0?001)。

  2?4 小鼠精子形态学观察(表2) 表2 苦瓜水提取物对小鼠精子畸形发生率的影响(略)                 

  χ2检验显示,各试验组精子畸形率与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0?05),而各试验组和阴性对照组精子畸形率显著低于环磷酰胺组(P<0?01)。提示苦瓜水提物对小鼠精子畸形发生率无明显影响。

  3 讨 论

  本实验结果表明,(1)苦瓜水提取物对精子的存活率有显著影响,3个剂量组与对照组比较分别下降了9?75%,13?79%,11?72%;(2)苦瓜水提取物能提高存活精子的活动度,5?000,10?000?mg/(kg·bw)剂量组与对照组比较,活动度有明显提高,分别较对照组提高了9?9%,16?0%;(3)苦瓜水提取物3个剂量组精子数量虽较对照组均有下降,但差异无统计学意义;(4)未见苦瓜水提取物对小鼠精子形态有明显影响。本实验观察结果与覃国芳等〔8〕、Nasseem MI等〔9〕的报道相似,精子存活率下降,理论上讲可导致生育力下降;也有不同,即存活精子活动度增强,精子计数未见明显下降,畸形数未见明显增加。这可能与苦瓜提取方式、受试对象物种不同有关。由于苦瓜水提取物成分目前还不是十分清楚,导致精子存活率下降、存活精子活动度增加的作用机制,有待于进一步研究。

【参考文献】
    〔1〕袁涌,贺吉川,李妍.苦瓜的作用之浅谈[J].中华临床,2004,5(11):108-109.

  〔2〕刘霞,李生才,冯长根.苦瓜的研究进展[J].材,2002,25(3):211-213.

  〔3〕陈红琳.苦瓜的药理研究概况[J].中华杂志,2002,9(18):1504-1505.

  〔4〕刘宝山,庞宗然,刘晓刚,等.苦瓜及其复方制剂降糖作用的研究进展[J].河北医学,2002,8(2)184-187.

  〔5〕食品安全性毒评价程序和方法[S].GB15193-2003.57.

  〔6〕李涤生.临床检验基础[M].北京:人民卫生出版社,1991:283.

  〔7〕叶应妩,李健斋,王玉琛.临床实验诊断学(下)[M].北京:人民卫生出版社,1991:1543.

  〔8〕覃国芳,李远慧,张振强,等.苦瓜果对雄性大鼠生育力的影响[J].贵阳医学院学报,1995,20(1):14.

  〔9〕Naseem MI,Patil SR.Antispermatogenic and androgenic activities of Momordica(karela)in albino rats[J].J Ethnopharmacol,1998,61(1):9-

苦瓜水提取物对雄性小鼠精子影响?相关推荐