慢性阻塞性肺疾病患者诱导痰IL8、TNFα水平和炎症细胞的分布

慢性阻塞性肺疾病患者诱导痰IL8、TNFα水平和炎症细胞的分布

【摘要】 目的 比较稳定期慢性阻塞性肺疾病(COPD)老年患者、老年健康吸烟者和老年健康非吸烟者痰液中IL8、TNFα水平和炎症细胞组成的差异，进而探讨IL8、TNFα、中性粒细胞与吸烟的相关性以及COPD气道炎症的性质。 方法 98例老年研究对象分为3组：COPD组38例、健康吸烟组（HS）30例、健康不吸烟组（HNS）30例，诱导痰方法收集痰液，细胞分类及计数，并用酶联免疫吸附法(ELISA)测定痰上清液中IL8、TNFα浓度。结果 COPD组痰液中IL8,、TNFα、中性粒细胞百分比明显高于健康吸烟组及健康不吸烟组；COPD组痰液中IL8、TNFα水平与中性粒细胞百分比呈显著正相关性（r=0761,r=0495）；健康吸烟组痰中IL?8水平与中性粒细胞百分比亦呈显著正相关性（r=0544）。结论 IL8和TNFα和中性粒细胞共同参与了吸烟者COPD气道炎症反应。
【关键词】 慢性阻塞性肺疾病；气道炎症；IL?8；TNF?α；中性粒细胞
　　约80%～90%的慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者是吸烟者，但是仅有20%的吸烟者发展为COPD〔1〕，提示对COPD易感性不同的人群，其气道对同样的香烟刺激的反应性不同。目前认为，吸烟引起的气道和肺组织异常的炎症反应是COPD发病学的中心环节，多种炎症细胞、炎症介质和细胞因子参与COPD复杂的炎症网络。以往的研究认为在COPD急性加重期气道中性粒细胞明显增加〔2〕，而在稳定期COPD患者和吸烟肺功能正常者之间气道中性粒细胞是否存在差异争议颇大〔3～5〕。IL?8和TNF?α有较强的中性粒细胞趋化作用，本文比较了稳定期COPD老年患者、老年健康吸烟者和老年健康非吸烟者痰液中IL?8、TNF?α水平炎症细胞的差异，进而探讨COPD气道炎症的性质。
　　1 材料与方法
　　1?1 研究对象
　　本研究对象均为男性，来自2004～2005年门诊病例及健康查体人员，经询问病史、体检、X线检查、肺通气功能检查，分为以下3组：
　　1?1?1 COPD组
　　符合中华医学会呼吸病学分会COPD诊断标准〔6〕并处于稳定期的患者38例，年龄60～78岁，平均（63?6±6?2）岁，均有吸烟史，其中戒烟者4例，戒烟年限15～23年，吸烟年限18～46年，根据肺功能测定结果，对COPD的严重程度进行分级〔6〕。本组病人支气管舒张试验均为阴性，排除呼吸道变态反应病史及肺癌、心功能不全等疾患。
　　1?1?2 健康吸烟组（HS）
　　30例，年龄61～73岁，平均（64?1±5?9）岁。肺功能检测FEV1?0占预计值(pred)百分比均＞80% ，FEV1?0/FVC均＞70%，支气管舒张试验均为阴性。排除呼吸道变态反应病史及肺癌、心功能不全等疾患。
　　1?1?3 健康不吸烟组(HNS)：30例，年龄60～74岁，平均（63?5±7?1）岁。肺功能检测FEV1?0占预计值百分比均＞85%，FEV1?0/FVC均＞70%。
　　1?2 实验步骤及方法
　　1?2?1 肺功能检查

　　所有研究对象在入选前进行肺功能测定，记录用力肺活量(FVC)、第1秒用力呼气量(FEV1)、第1秒用力呼气量占预计值百分比(FEV1/pred%)、第一秒用力呼气量占用力肺活量的百分比(FEV1/FVC%)。
　　1?2?2 痰标本的收集及处理
　　参照文献〔7，8〕报道的方法，首先吸入喘康速200 μg，超声雾化吸入3%高渗盐水（雾化量为0?4 ml/min），雾化时间为5～10 min。将病人咳出的痰收集于无菌干燥的培养皿中，挑选出黏液部分放入无菌干燥试管中称重，加入4倍量0?1%DTT（二硫苏糖醇），37℃水浴15 min，以有效溶解痰液，再加入4倍量磷酸盐缓冲液（0?01 mol/L pH7?4 PBS）充分洗涤细胞5 min，2 000 r/min离心10 min。离心后的上清液-70℃保存待测，沉淀留作痰细胞学检查。
　　1?2?3 痰液细胞计数及分类
　　制备痰细胞学涂片2～3张，室温下自然风干，做HE染色。光学显微镜下进行细胞计数及分类，至少计数300个细胞，分类计数中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞及嗜酸性粒细胞，检查两张涂片，取其平均数，得出各种细胞所占百分率。
　　1?2?4 痰上清液IL?8、TNF?α浓度的检测
　　IL?8、TNF?α采用酶联免疫吸附法（ELISA）。操作步骤按试剂盒(美国GeneMay公司)说明书进行，敏感度为16 pg/ml。
　　1?3 统计学分析
　　数据均以x±s表示，组间比较分析用t检验或t′检验、χ2检验。数值变量之间的依存关系用相关系数r表示，并应用t检验，使用统计学处理软件医用CS10?3、Microsoft excell处理原始数据，并图示其相关性。
2 结 果
　　2?1 COPD组与HS组病例资料比较
　　见表1。表1 COPD组与HS组病人资料比较(略)
　　2?2 炎症细胞计数与分类
　　痰液中的细胞主要是中性粒细胞和巨噬细胞，嗜酸性粒细胞、淋巴细胞。COPD组诱导痰中性粒细胞百分比明显高于HS组（t=8?34）及HNS组（t=11?15 ），差异有显著性（P＜0?01）。HS组与HNS组痰中性粒细胞的百分比相比较，差异有显著性(t=3?48,P＜0?01)。各组间嗜酸性粒细胞和淋巴细胞分类差异无显著性（见表2）。表2 各组痰液细胞分类的比较(略

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