PTTG、VEGFC 的表达及微淋巴管密度与非小细胞肺癌临床病理特征的
作者：尹秋伟 郭旭峰 胡国强 赵健 李希波【摘要】 目的 检测非小细胞肺癌（non?small cell lung cancer，NSCLC）、癌旁组织及肺良性病变组织中垂体瘤转化基因（pituitary tumor transforming gene,PTTG）及血管内皮生长因子?C(vascular endothelial growth factor，VEGF?C)的表达和微淋巴管密度(lymphatic microvessel density，LMVD)值，并探讨三者间的相互关系。方法 应用实时荧光定量 PCR 和免疫组织化学方法检测非小细胞肺癌组织中 PTTG、VEGF?C mRNA 和蛋白及 LMVD 的表达，分析 PTTG、VEGFC 及 LMVD 与 NSCLC 临床病理特征的关系，以及 PTTG、VEGFC 和 LMVD 三者之间的'相互关系。同时，对随访资料进行生存分析，绘制生存率曲线，探讨 PTTG、VEGF?C 对肺癌患者预后的影响。结果 PTTG、VEGF?C mRNA 和 LMVD 值在不同性质的肺病变组织中的表达均有显著性差异(P均＜0?05)，在不同年龄、性别、是否吸烟、肿瘤大小、组织学类型及分化程度间无显著性差异(P均＞005)，在TNM分期、淋巴结转移与否及预后组间有显著性差异(P均＜005)。PTTG、VEGF?C 蛋白表达在淋巴结转移与否及预后组间有显著性差异(P均＜005)。生存率曲线显示 PTTG、VEGF?C 高表达者生存时间均短于低/无表达者(P=0030，0027，n=65)。PTTG 在肺癌组织中的表达与 VEGF?C、LMVD 密切相关，随着 PTTG 强度增加，VEGFC 分级及 LMVD 值亦增加。结论 PTTG、VEGF?C 的过度表达促使肿瘤微淋巴管的生成，进而促进了肿瘤细胞淋巴结转移。PTTG 和 VEGF?C 表达可作为判断 NSCLC 生物学行为及肺癌患者预后的良好指标，VEGF?C 有望成为肺癌抗淋巴管治疗的新靶点。
【关键词】 垂体瘤转化基因；血管内皮生长因子C；微淋巴管密度；实时荧光定量PCR
垂体瘤转化基因(PTTG)是1997年〔1〕 被发现并证实与细胞增殖、分化和凋亡有关的癌基因。血管内皮生长因子(VEGF)C 被认为是迄今发现的唯一特异性新生淋巴管刺激因子,可促进肿瘤微淋巴管生成及肿瘤细胞向区域淋巴结转移。有研究〔2〕 显示 PTTG 可通过促进 VEGFC 的过度表达，促使肿瘤细胞发生淋巴结转移。国内外已报道 PTTG 在食管癌、胃癌和卵巢癌等多种肿瘤中高表达，但目前尚未见对 PTTG 在肺癌中表达研究的报道。以往关于 VEGFC 的研究多为蛋白半定量分析，本实验结合免疫组化应用实时荧光定量 PCR 对非小细胞肺癌(NSCLC)组织中 PTTG、VEGF?C 的表达进行精确定量分析，并检测微淋巴管密度(LMVD)的表达情况,旨在探讨它们与 NSCLC 临床病理特征及预后的关系。
1 材料与方法
1?1 研究对象
收集65例 NSCLC 组织，均来自手术切除且经病理科常规病理学检查证实。男∶女为40∶25，年龄43～78（中位数58?8）岁。依据1997年新的修订标准进行TNM分期，其中Ⅰ期7例，Ⅱ期28例，Ⅲ期26例，Ⅳ期4例；按病理形态学分为鳞状细胞癌36例，腺癌26例，大细胞癌3例；按分化程度分为高分化5例，中分化18例，低分化42例；按有无淋巴结转移分为有淋巴结转移37例，无淋巴结转移28例。所有患者均为原发性 NSCLC，术前均未接受过化疗或放疗等任何治疗。同时取65例配对的癌旁组织和20例肺良性瘤样病变组织(包括结核球10例，错构瘤4例，炎性假瘤4例，肺纤维组织细胞瘤1例，肺隐球菌感染1例)。癌旁组织为距肿块边缘5 cm以上的正常组织。肺癌组织和肺良性病变组织均取自肿块中央非坏死部分。标本经10％甲醛固定，常规脱水，石蜡包埋。65例患者无住院期间死亡，随访日期以患者手术日期起计算，术后随访至2006年5月。
1?2 实验用品
RNAiso Reagent、SYBR ExScriptTM RT?PCR Kit(DRR053S) 均购自TaKaRa公司，引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成，其他各种化学试剂均为进口或国产分析纯。采用ABI PRISM 7000 实时 PCR扩增仪。兔抗人多克隆抗体 PTTG、VEGFC、VEGFR?3及免疫组织化学试剂盒PV9000均购自北京中山生物技术公司。