尤文肉瘤细胞总RNA修饰的树突状细胞的体外培养及其鉴定

时间:2020-10-07 09:29:14 药学毕业论文 我要投稿

尤文肉瘤细胞总RNA修饰的树突状细胞的体外培养及其鉴定

作者:王剑,桑宏勋,王臻,郭征
【关键词】 树突细胞;肉瘤,Ewing;总RNA;逆转录聚合酶链反应;癌症疫苗
【Abstract】 AIM: To investigate RNA expression of dendritic cells(DC) pulsed with totol RNA from Ewing sarcoma cells. METHODS: DC was generated from the peripheral blood mononuclear cells(PBMC) of Ewing sarcoma patients. Surface markers of matured DCs was detected by flow cytometer(FCM). Total RNA was isolated from Ewing sarcoma by Trizol. DC were transfected with total tumor cell RNA. The expression of DC tansfected with total RNA was measured by RTPCR method. RESULTS: Surface markers of DC pulsed with total RNA changed apparently. CD40 increased from 32.24% to 72.32%. CD83 increased from 17.39% to 30.97%, while monocyte CD14 declined from 26.37% to 10.46% .This indicated the significant reinforcement of antigen presentation of DC. RTPCR showed the specific sequence EWSFLI1 of Ewing sarcoma can be combined with the primer specifically at the best temperature of 54℃. CONCLUSION: DC pulsed with total RNA of Ewing sarcoma cells can present tumor specific antigen and express its characteristic sequence EWSFLI1 specifically.
【Keywords】 dendritic cells; sarcoma, Ewings; total RNA; reverse transcriptase polymerase chain reaction; cancer vaccines
【摘要】 目的: 探讨树突状细胞(DC)经尤文肉瘤细胞总RNA加载后的体外RNA表达情况. 方法: 采用分离尤文肉瘤患者外周血单核细胞体外诱导DC,用流式细胞仪检测DC成熟后的表面标志,Trizol法提取患者尤文肉瘤组织总RNA,用总RNA转染DC,用RTPCR方法检测肿瘤总RNA加载的DC的表达. 结果: 经尤文肉瘤总RNA加载的DC表面标记发生明显变化,DC的特异性表面标志如CD40由32.24%增高至72.32%,CD83由17.39%增高至30.97%,而代表单核细胞的CD14则由26.37%下降至10.46%,标志其抗原呈递功能显著增强. RTPCR测定显示尤文肉瘤中的特异性序列EWSFLI1可以和引物特异性结合,并且最佳结合温度为54℃. 结论: 尤文肉瘤细胞总RNA转染的'DC可以呈递肿瘤特异性抗原,并特异性的表达其特有序列EWSFLI1.
【关键词】 树突细胞;肉瘤,Ewing;总RNA;逆转录聚合酶链反应;癌症疫苗
0引言
细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes, CTL)能够介导特异性免疫应答,引导特异性肿瘤细胞杀伤效应. CTL的特异性免疫应答依赖于肿瘤抗原的存在,肿瘤抗原被抗原呈递细胞(antigen presenting cell, APC)识别吞噬后,在抗原递呈细胞内加工处理形成特定的多肽片段,与MHCI类分子完全匹配后递呈到细胞表面,被相应T细胞受体(T cell receptor, TCR)识别,形成肿瘤抗原多肽MHCTCR复合物,在协同刺激因子的共同作用下,激活特异性细胞毒性T淋巴细胞,产生免疫反应、清除肿瘤细胞[1]. 树突状细胞(dendritic cells, DC)是体内最重要的专职抗原递呈细胞[2],可由骨髓干细胞、外周血干细胞及外周血单个核细胞在细胞因子作用下诱导扩增. 95%的尤文肉瘤家族具有特异的染色体异位,从而形成的EWSFLI1融合基因是尤文肉瘤家族发生、进展的主要原因[3]. 本研究从尤文肉瘤患者外周血中分离单个核细胞在IL4和GMCSF诱导下分化扩增DC,从患者尤文肉瘤组织中提取肿瘤总RNA加载DC,并对经总RNA加载后的DC进行鉴定,确定经肿瘤RNA加载的DC持续表达相应特异性肿瘤抗原,为DC在尤文肉瘤生物学免疫治疗中的临床应用提供实验依据.
1材料和方法
1.1材料RPMI1640 (美国GIBCO公司,14.1 g/包);胎牛血清(杭州四季青,250 mL/瓶);IL4(美国R&D 公司,lot#AG1

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