糖尿病并微血管病变患者血小板CD62p及CD63的表达及其临床意义

时间：2023-03-18 15:51:56 药学毕业论文我要投稿

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【摘要】目的观察糖尿病肾病(DN)患者血小板α颗粒膜糖蛋白(CD62p)和溶酶体膜蛋白(CD63)的变化及其临床意义。方法采用流式细胞术(FCW)检测158例糖尿病(DM)患者血浆中CD62p和CD63的阳性表达率，并与45例健康对照者进行比较。结果单纯性DM组血浆CD62p和CD63的阳性表达率显著高于对照组(P＜0?01)，DN微量白蛋白组及大量白蛋白组均显著高于单纯性DM组(均P＜0?01)，DN尿毒症组显著低于对照组(P＜0?01)。结论 2型糖尿病(T2DM)及DN患者血小板活化均增强，而尿毒症期血小板活化功能低下，血浆CD62p和CD63的测定对DN早期诊断和病情监测有重要的临床价值。
【关键词】糖尿病；微血管病变；血小板膜糖蛋白；流式细胞术
　　糖尿病(DM)与遗传、自身免疫及环境等多种因素有关。糖尿病肾病(DN)是DM的一种严重血管并发症，是引发DM患者死亡的主要原因之一。在疾病的慢性进程中，循环血中处于静息状态的血小板在各种理化和生物因子的作用下，使血小板内的颗粒膜糖蛋白和质膜糖蛋白迅速发生数量重排和构型变化而激活成为活化血小板。检测活化血小板方法有血小板凝集试验、血小板第4因子(FP4)和β血小板球蛋白(βTG)测定，但这些方法只能半定量，难以标准化，不能测定血小板活化量〔1〕。随着单克隆抗体和流式细胞仪的应用，检测血小板表面活化相关抗原的表达能够反映血小板活化，大大提高试验的特异性和敏感性。本文通过流式细胞术(FCM)检测DM患者血浆中CD62p和CD63的阳性表达率，以探讨其临床意义。
　　1 材料与方法
　　1?1 对象
　　按WHO DM诊断标准〔2〕确诊的DM患者158例，其中男80例，女78例，年龄56～81(平均62?21±10?46)岁。所有病例病程稳定，无急性代谢紊乱，无肝病、肿瘤及风湿性疾病，近期无使用影响肾功能的药物，未服用双嘧达莫、肠溶阿司匹林、复方丹参等抗血小板药物。根据白蛋白排泄率(AER)将其分为①单纯性DM组(DM组)：AER ＜20 μg/min，40例，男性18例，女性22例，年龄为59～74(平均64?10±8?33)岁；②DN微量白蛋白组(DNⅠ组)：AER 20～200 μg/min，49例，男性24例，女性25例，年龄为56～79(平均63?76±8?67)岁；③DN大量白蛋白组(DNⅡ组)：AER ＞200 μg/min，43例，男23例，女20例，年龄57～81(平均63?18±10?03)岁；④DN尿毒症组(尿毒症组)：其肾功能减退已达到尿毒症期，26例，男性15例，女性11例，年龄为63～77(平均66?30±7?41)岁。对照组：45例，男性21例，女性24例，年龄56～77(平均63?27±9?82)岁，排除DM、高血压、冠心病、高血脂症、泌尿系感染、内分泌疾病及肝肾疾病的健康体检者。
　　1?2 仪器及试剂
　　EPICS XL型流式细胞仪为美国Beckman coulter公司生产。流式细胞仪校正微球(Flow check)由美国Beckman coulter公司提供(批号：1683)。荧光标记单克隆抗体：藻红蛋白(PE)标记的McAb(CD62p?PE，批号：1597；CD63?EP，批号：1923；免疫阴性对照MouseIgG1?EP,批号：1607)均为法国Immunotech公司产品。
　　1?3 方法
　　1?3?1 标本准备
　　采集静脉血3 ml，乙二胺四乙酸二钾(EDTA?K2)抗凝离心(800 r/min，10 min)，吸上层血浆500 μl于干净试管中，加入等量的2?5%多聚甲醛500 μl混匀，15 min后加磷酸盐缓冲液(PBS)2 ml，离心(1 500 r/min,10 min)洗涤3次，然后用PBS将其调节成血小板浓度为3×109L-1的血小板悬液。取3支干净的塑料试管，各管加入血小板悬液100 μl，再分别加入20 μl CD62p、CD63及鼠IgG1，避光反应15 min，然后各管加1 ml PBS，混匀待测。
　　1?3?2 上机测定
　　流式细胞仪上机检测前用配机提供的校正微球进行流路和光路的校正，上机计数2×104个血小板，血小板CD62p及CD63含量以其阳性细胞百分率表示。
　1?4 统计学处理
　　采用t检验。
　　2 结果

　　CD62p、CD63的阳性表达率DM组明显高于对照组(P＜0?01)，DN组较DM组明显增高(P＜0?01)，尿毒症组则明显低于对照组(P＜0?01)，见表1。表1 各组血小板CD62p、CD63结果比较(略)
　　3 讨论

　　DM患者由于长期处于高血糖状态，而血糖刺激促使血小板释放，致使血小板处于激活状态，加速了血小板的基本生理功能。同时，DM随着病程的进展常伴有脂代谢紊乱，高脂血症也可以使血液黏稠度增加，可诱发微血管病变〔3〕。部分毛细血管处于破损或细小病变中，存在一定程度的血小板聚集和黏附。同时凝血过程及受伤和内皮组织分泌凝血酶、ATP血小板活化剂，促进血小板活化，血小板α颗粒膜糖蛋白140(GMP140)、溶酶体蛋白(GP53)、磷脂酰丝氨酸(PS)暴露于胞浆膜表面，纤维蛋白原受体暴露增加，GPⅡb/Ⅲa复合物增加。血小板在活化时，细胞内容物释放到细胞外，参与止血、凝血、炎症及组织的修复过程，直接或间接作用于血管壁细胞和(或)其基质部分，引起内皮细胞功能紊乱，导致血管内斑块和血栓形成〔4〕。微血栓又可促进血小板大量活化，介导白细胞黏附，T细胞、巨噬细胞聚集；在高血糖环境下，蛋白激酶C激活，从而出现微

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