PI-103对多药耐药白血病细胞体外作用的研究
【摘要】 目的 研究PI-103对耐药白血病细胞的效果及其机制。方法 四甲基偶氮唑蓝（MTT）法研究PI-103对K562及K562/A02细胞增殖的影响，流式细胞术研究细胞内阿霉素浓度的改变。结果 PI-103能显著抑制两种细胞株的生长，对敏感和耐药白血病细胞株具有相同的抑制效果；PI-103能显著增加细胞内阿霉素的浓度，与阿霉素联用时，能增加阿霉素对细胞的生长抑制作用，但仅有叠加效应而无协同效应。结论 PI-103对于耐药白血病是一种有良好应用前景的药物。
【关键词】 白血病 多药耐药 PI-103
多药耐药是急性白血病治疗失败的主要原因，其主要机制是P-糖蛋白（Pgp）高表达，将细胞内的化疗药物“泵”出细胞外，导致细胞内药物浓度过低，使白血病细胞呈现出耐药表型。如何绕过Pgp的泵作用，逆转耐药，提高白血病的治疗效果是当前治疗的重要方向。K562/A02是由K562细胞经长期阿霉素诱导和克隆筛选而建立的一个耐药细胞系[1]，能在2μg/ml阿霉素中长期生存，对阿霉素的耐药指数在10以上。它高表达Pgp，是体外研究多药耐药的一个较好的细胞模型。
PI-103是一种人工合成的PI3K和mTOR特异性抑制剂。PI3K和mTOR是PI3K/AKT/mTOR信号转导途径的重要成员，该信号途径在肿瘤的发生发展中发挥着重要的作用。近年来发现PI-103对黑色素瘤[2]、肺癌[3]、神经肿瘤[4]等多种肿瘤具有抑制作用，显示了较好的抗肿瘤效果。本研究旨在研究它对多药耐药白血病细胞株K562/A02的作用。
1 材料和方法
1.1细胞株及培养条件 K562及K562/A02细胞株由浙江大学医学院第一附属医院血液病研究所传代保存。培养基为含10%胎牛血清的RPMI1640（Gibco公司产品），置37℃、5%CO2、饱和湿度培养箱中培养，K562/A02长期以2μg/ml阿霉素（ADM）加压培养，在实验前2周撤除阿霉素。取对数生长期的.细胞进行实验。PI-103购自美国cayman公司。
1.2MTT法测定细胞增殖：取对数生长期细胞，调整细胞浓度，以1×105个细胞/ml的终浓度接种于96孔培养板，加入不同浓度药物，空白对照组以培养基补足，每孔总体系0.2ml，CO2孵箱内培养24小时（h），加MTT工作液20μl/孔（美国Sigma公司），置CO2培养箱中孵育4h，1000 rpm/min离心，小心吸去上清，加入二甲基亚砜0.2ml/孔，吹打，使紫蓝色甲臜沉淀充分溶解。在酶标仪570nm波长处读取吸光度值（A）。以时间为横轴，A值为纵轴，绘制细胞生长曲线。实验重复三次，设复孔三个，取平均值为最终结果。按下列公式计算细胞增殖率：
细胞生存率=（A处理组-A空白组）/（A对照组-A空白组）*100%
细胞生长抑制率=1-细胞生存率