克隆柞蚕免疫相关基因克隆和诱导表达
昆虫仅具有先天性免疫，不具有适应性免疫，以下是小编搜集整理的一篇探究克隆柞蚕免疫相关基因克隆的论文范文，欢迎阅读查看。
前言
昆虫免疫主要是以产生的抗菌肽、抗病毒因子、凝集素、溶菌酶及蛋白酶抑制剂等多种活性物质，配合多种功能的血细胞建立的一个开放防御体系。昆虫仅具有先天性免疫，不具有适应性免疫。昆虫的先天免疫系统主要分为细胞免疫和体液免疫2大部分。体液免疫中转录因子Rel/NF—κB介导的信号转导通路主要有Toll通路和Imd通路[1]，昆虫主要通过这2种通路抵抗微生物的侵染。
研究发现，这2种通路通过激活不同的Rel/NF—κB家族成员调控不同抗菌肽基因的表达，其中Toll通路主要激活转录因子Dorsal和Dif，Imd通路主要激活转录因子Relish[1—5]。已知的Rel/NF—κB蛋白家族成员有8种，哺乳动物中有5种，昆虫细胞中的3种分别是Dorsal、Dif和Relish。其中Dorsal和Dif无锚定重复序列，Relish有锚定重复序列。Rel/NF—κB蛋白的主要功能是调节机体免疫应答、炎症反应、细胞凋亡和生长发育，炎症、癌症、自身免疫疾病等病理过程与NF—κB的过度活化相关[6]。
由于Rel/NF—κB介导的Toll通路与Imd通路在无脊椎动物和脊椎动物中非常保守[1，7]，因此，对昆虫Rel/NF—κB的研究不仅能够系统了解昆虫的先天免疫机制，而且可为深入了解高等动物的免疫机制及疾病防治提供重要依据。尽管Rel/NF—κB蛋白在先天免疫过程中起着非常重要的作用，但目前为止尚未见到有关柞蚕Rel/NF—κB家族成员的报道。本项研究利用生物信息学方法和分子生物学技术，以柞蚕蛹为试验材料，克隆柞蚕免疫相关基因Apdorsal的全长cDNA序列，并将其编码的氨基酸序列与其它物种的Rel/NF—κB氨基酸序列进行比对及构建系统进化树，利用实时荧光定量PCR技术检测Apdorsal基因经不同微生物诱导处理后的组织表达变化，为探讨柞蚕的先天免疫机制提供参考。
1材料与方法
1。1材料和主要试剂
供试柞蚕品种为青6号，柞蚕蛹由辽宁省蚕业科学研究所惠赠，4℃条件下保存备用。大肠杆菌（E。coli）Top10、枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）、毕赤酵母（https://p.9136.com/28pImmunol，2010，34（2）：93—96
[15]TakedaK，AkiraS。Tollreceptorsandpathogenresistance[J]。CellMicrobiol，2003，5（3）：143—153
[16]ZambonRA，NandakumarM，VakhariaVN，etal。TheTollpathwayisimportantforanantiviralresponseinDrosophila[J]。ProcNatlAcadSciUSA，2005，102（20）：7257—7262
[17]HiraiM，TereniusO，LiW，etal。BaculovirusanddsRNAinduceHemolin，butnoantibacterialactivity，inAntheraeapernyi[J]。InsectMolBiol，2004，13（4）：399—405
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