探究云母颗粒对无水乙醇诱导大鼠胃黏膜损伤的影响及机理

时间:2020-09-01 10:02:29 临床医学毕业论文 我要投稿

探究云母颗粒对无水乙醇诱导大鼠胃黏膜损伤的影响及机理

毕业论文

                   作者(冒号):钦丹萍 吕海丽 邵国民 任永葆 韩建新 邱添 黄1鸣 

【摘要】    [目的]研究云母颗粒对无水乙醇诱导大鼠胃黏膜损伤的保护作用及其机理。[方法]将48只健康雄性SD大鼠随机分为云母颗粒高、中、低剂量组,思密达组,模型对照组,空白对照组6组。分别将云母颗粒和思密达预先灌胃于相应各组大鼠,3h后以1ml/100g无水乙醇灌胃致胃黏膜损伤,45min后下腔静脉取适量血,处死取胃,然后分别检测各组的胃黏膜损伤指数、血清和胃黏膜组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙2醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH?Px)含量,并观察病理学变化,以评价胃黏膜损伤程度及药物的作用。[结果]云母各剂量组中SOD、GSH?Px含量均显著高于模型对照组,而MDA含量则明显低于模型对照组(P<0.05)。[结论]云母颗粒对无水乙醇诱导的大鼠胃黏膜损伤具有预防与保护作用,其保护作用是通过增加大鼠血清和胃黏膜组织中SOD、GSH?Px含量并减少MDA的生成来实现的,即云母颗粒具有抗脂质过氧化作用。

【关键词】  云母颗粒 无水乙醇 损伤指数 损伤程度 超氧化物歧化酶 丙2醛 谷胱甘肽过氧化物酶

  Abstract(冒号):[Objective] To study the protection and mechanism of mica granules to rats stomach mucosa injury caused by non?water ethanol.[Method] Randomly divide 48 healthy SD rats into high?,middle?and low?dosed groups of mica granules,Simida group,model control group and blank control group as well,i.e.6 groups.After fasting for 24h,separately make stomach perfusion of mica granules and Simida to all rats in advance;after 3h,make stomach perfusion of non?water ethanol 1ml/100g for stomach mucosa injury;45m later,take proper blood of lower vena cava,sacrifice them for stomach,then respectively test all mucosa injury index,SOD,MDA,and GSH?Px content in serum and mucosa,observe pathological changes to evaluate mucosa injury degree and medical function.[Result] In mica groups,the SOD and GSH?Px were markedly higher than that in model control group,but MDA was lower than later(P<0.05).[Conclusion] Mica granules have prevention and protection to rats gastric mucosa injury caused by non?water ethanol,which is produced from mica granules' increasing SOD,GSH?Px content and decreasing MDA in serum and gastric mucosa,i.e.mica granules have function of anti?lipid peroxidation.

  Key words(冒号):mica granules;non?water ethanol;injury index;injury degree;SOD;MDA;GSH?Px
   
  本实验通过预防性予大鼠灌服云母颗粒,并与思密达作对照,观察云母颗粒对大鼠胃黏膜损伤的防治疗效,同时从血清和胃黏膜组织中SOD、MDA、GSH?Px方面探讨其可能的作用机制。

  1  实验材料
   
  动物模型(冒号):健康SD大鼠48只,SPF级,体重200±20g,雄性,购自中科院上海实验动物中心,标准饲料饲养于浙江中医药大学实验动物中心。药物及制备(冒号):云母颗粒由浙产绢云母组成,其粒子直径40%以上达6250目,由江苏江阴中药厂制剂,3g/袋,浙江省中医院中药房提供。思密达(蒙脱石散剂)(冒号):博福-益普生(天津)制药有限公司生产,国药准字H20000690;灌胃时均加适量生理盐水(NS)进行稀释。仪器与试剂(冒号):自动匀浆机(苏州医疗机械公司),台式高速离心机(海安亭科学仪器厂 型号(冒号):DL?5?6),721可见光光度计(上海欣茂仪器有限公司),BH体视显微镜(北京泰克仪器有限公司),超氧化物岐化酶试剂盒、丙2醛试剂盒和谷胱甘肽过氧化物酶试剂盒(南京建成生物工程研究所 批号分别为(冒号):20061214;20061248;20061265)。

  2  实验方法

  2.1  造模与实验方法

  2.2  观察指标

  2.2.1  胃黏膜损伤指数  处死大鼠后,立刻剖腹取胃,沿大弯侧剪开,用NS冲洗,滤纸吸干,平铺于滤纸上。黏膜损伤的'程度以损伤指数表示,计分参考Guth[1]等的标准。正常胃黏膜为0分,点状损伤计1分,病损小于1mm计2分,1~2mm计3分,2~3mm计4分,依次类推,损伤宽度大于2mm,损伤指数计分加倍。

  2.2.2  病理学检查  在胃黏膜组织上,从小弯侧到大弯侧切下1条10mm宽的胃黏膜组织,用10%甲醛溶液固定,经切片及HE染色,在光镜下观察胃黏膜表面的病理学改变。黏膜损伤程度判断标准[2](冒号):0级为无损伤;1级为黏膜表面上皮细胞损伤;2级损伤累及胃小凹;3级损伤侵及浅层胃腺;4级损伤达到腺体深部。在光镜下分别计算出总损伤长度占所取黏膜标本长度的百分比。

  2.2.3  各组血清中SOD、MDA、GSH?Px的含量  取大鼠血液4ml,注入试管中,4℃下用普通离心机3000r/min离心10min,取上清液,-200C保存至测定。测定时严格按说明书操作进行。

  2.2.4  各组胃黏膜中SOD、MDA、GSH?Px的含量  取腺胃黏膜适量,即刻电子天平上称重后,置于试管中,加入适量NS用自动匀浆机制成10%匀浆,4℃下用普通离心机3000r/min离心10min,取上清液,-20℃保存待测。测定时严格根据说明书操作进行。

  2.2.5  统计学方法  用SPSS13.0软件统计包对各组数据进行统计分析。计量资料用均数±标准差(x±s)表示;均数间两两比较用q检验,以P<0.05为差异显著的检验标准。计数资料用秩和检验,P<0.05为具有统计学意义。


  3  结果

  3.1  胃黏膜损伤的影响  大体观下空白对照组胃黏膜表面光滑,附有较多黏液,黏膜皱襞光整,未见溃疡、糜烂、出血点。模型对照组黏膜充血水肿明显,可见片状糜烂坏死灶形成。云母高、中、低剂量组及思密达组黏膜光滑,充血水肿糜烂程度轻。对胃黏膜损伤指数分析显示(冒号):云母高、中、低剂量组及思密达组胃黏膜损伤指数显著低于模型对照组(P<0.05),云母各剂量组间比较及其分别与思密达组比较均不存在显著差异(P>0.05)。光镜下空白对照组黏膜层、固有层、肌层结构完整连续,依次排列,腺体排列紧密,未见炎性细胞浸润。模型对照组黏膜结构排列紊乱失去完整性及连续性,部分区域黏膜上皮层缺失,损伤多累及胃深部腺体,可见大量炎性细胞浸润;云母高、中、低剂量组及思密达组各层排列欠整齐,部分损伤可累及胃小凹及胃腺体,可见炎性细胞浸润。统计学分析显示,云母高、中、低剂量组及思密达组粘膜损伤程度显著低于模型对照组(P<0.05),云母各剂量组间比较及其分别与思密达组比较均无显著差异(P>0.05)。损伤长度百分比云母高、中、低剂量组及思密达组亦显著低于模型对照组(P<0.05),而云母各剂量组间比较及其分别与思密达组比较则均无显著差异(P>0.05)。
   
  因此,上述的研究提示云母颗粒对胃黏膜损伤具有保护作用。

  3.2  如表1示,各组血清中SOD、GSH?Px、MDA的含量的表达  统计学比较显示模型对照组血清中SOD和GSH?Px含量均显著低于空白组含量、云母各剂量组和思密达组(P<0.05);思密达组中SOD含量亦明显低于云母高、中剂量组(P<0.05);云母各剂量组间比较及思密达组与云母低剂量组比较均无显著差异(P>0.05)。云母低剂量组血清GSH?Px含量显著低于云母高剂量组(P<0.05)。模型对照组中MDA 含量明显高于空白对照组、云母各剂量组及思密达组(P<0.05),但云母各剂量组间比较及其分别与思密达组比较均不存在显著差异(P>0.05)。

  3.3  如表1示,各组胃黏膜组织中SOD、GSH?Px、MDA的含量表达  统计学比较显示模型对照组中胃黏膜SOD和GSH?Px含量明显低于空白组、云母各剂量组和思密达组(P<0.05);云母低剂量组SOD、GSH?Px含量均显著低于云母高剂量组(P<0.05),而云母中剂量组分别与高剂量组和低剂量组比较及思密达组分别与云母各治疗组比较均不存在显著差异(P>0.05)。并且模型对照组中MDA含量显著高于空白对照组、云母各剂量组及思密达组(P<0.05);思密达组和云母低剂量组胃黏膜组织中MDA含量显著高于云母高剂量组(P<0.05),而思密达组分别与云母中、低剂量组比较比较均无显著差异(P>0.05);云母高剂量组与中剂量组比较无显著差异(P>0.05)。

  表1  各组血清及胃黏膜组织中SOD、GSH?PX及MDA含量(略)

  与模型对照组比较,★P<0.05,与思密达组比较,▲P<0.05;与低剂量组比较,▼P<0.05,◆与高剂量组比较 P<0.05

  4   讨论
   
  本实验动物造模方法采用无水乙醇攻击导致胃黏膜急性损伤,乙醇能影响黏蛋白寡聚糖结构的合成及诱发氧自由基导致胃黏膜脂质过氧化,造成胃粘膜损伤[4]。1些氧自由基清除剂如SOD、GSH?Px具有良好的减轻氧自由基介导的胃黏膜损伤的保护作用。
   
  云母颗粒其粒子直径40%在6250目以上,能均匀吸附在胃肠黏膜表面。云母(muscovite)是鳞片状的天然矿石,为含钾、镁、铝的硅酸盐化合物[KA12(ALSi3)O10(OH2F)2],记载于《神农本草经》、《本草纲目》,谓其性味”甘、平、无毒”,有”补中”、”止血敛疮”作用。
   
  SOD作为胃黏膜细胞保护因子,其主要功能是将超氧阴离子自由基歧化生成过氧化氢,而过氧化氢在过氧化氢酶或谷胱甘肽过氧化物酶催化下生成水,使有害的自由基变成无害的物质[5]。GSH?Px存在于线粒体和胞浆内,具有清除氧自由基(OFR)能力,其主要是通过清除脂类氢过氧化物来参与胃黏膜保护机制[6]。

【参考文献】
    [1] Guth P H,Aurse D,Paucsen G,et a.l Topical aspirin plusHCL gastric lesion in the rat,Cytoprtective effect of prostagiandin,Cimctidinc and probanthinc[J].Gastroenterology,1979,76 (1)(冒号):88?93.

  [2] Eric R L,Susumu I.Microscopic analysis of ethanol damage to ratgastricmucosa after treatmentwith a prostaglandin[J].Gastroenterology,1982,83(冒号):619?625.

  [3] 吴作燕.乙醇对大鼠胃黏膜慢性损伤及适应性细胞的保护作用[J].中华消化杂志 2006,26(1)(冒号):59?60.

  [4] 方尔笠.益气化瘀煎剂抗大鼠胃溃疡作用及其机制的探讨[J].中国中西医结合消化杂志,2001,9(4)(冒号):208?210.

  [5] Koch OR,Pani G,Borrello S,et al.Oxidative stress and antioxidant defenses in ethanol?induced cell injury[J].Mol AsPects Med,2004,25 (122)(冒号):191?198.

  [6] Balasubramanian T,et al.Taurine Prevents Ibuprofen?induced gastric mucosal lesions and influences endogenous antioxidant status of stomach in rats[J].ScientificWorldJournal,2004,4(冒号):1046?1054.

  [7] 刘树民.苍耳子对小鼠血清清氨基转移酶及肝脏丙2醛含量的影响[J].药物不良反应杂志,2006,8(1)(冒号):17.

  [8] 钦丹萍.云母颗粒对大鼠乙酸性结肠炎炎症与修复反应的影响[J].浙江中医药大学学报,2007,31(5)(冒号):562.

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